产品及特点
本产品是基于探针法荧光定量PCR原理设计的检测试剂盒，具有以下特点：

1. 即开即用，用户只需提供样品DNA模板。
2. 引物和其他组分经过优化，灵敏度高，使用方便。
3. 提供阳性对照，便于快速区分假阴性样品。
4. 特异性强，引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区域，不会与其他生物样本的DNA发生交叉反应。
5. 可用于定性和定量检测，定量检测时，线性范围至少达到5个数量级。
6. 本产品可支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
7. 本试剂盒仅供科研使用。

方法说明：
一、样本准备区的DNA提取
用户可以选择自定义方法提取纯化样品DNA，本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

二、标准曲线样品稀释（样本制备区）
为了避免样品或其他试剂盒成分的污染，阳性对照浓度较高的稀释操作应在独立区域进行。
1. 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头加入45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL 1×10E8拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，形成1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品。
4. 更换枪头，在6号管中加入5μL 1×10E7拷贝/μL的阳性对照，震荡1分钟，形成1×10E6拷贝/μL的标准样品。
5. 重复上述步骤，直到得到6个不同稀释度的标准曲线样品。如不需要制作标准曲线，仅需将阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL即可。

三、试剂准备区
若待检样品有N个，准备N+2个qPCR管（N个待检样品+1个阴性对照+6个阳性对照），向各PCR管中加入相应成分（详细说明书可向我司索取）。

四、模板添加
向qPCR管中分别加入2μL模板，添加顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板、婴儿利什曼虫qPCR阳性对照，离心30秒后立即进行扩增反应。

五、扩增反应
将PCR管放在PCR扩增仪器的样品槽中，进行扩增，扩增程序请参见详细说明书（可向我司索取）。

六、结果分析
1. 如果制作了标准曲线，以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴，绘制标准曲线，再根据待测样品的Ct值推算样品DNA浓度的log值。
2. 如果未制作标准曲线，依据以下标准判断结果：阳性对照若Ct值<30，表现出明显的指数增长且呈典型的S型曲线；阴性对照若Ct值38或无Ct值，则无明显指数增长期和平台期。
样本检测结果：Ct值<35且明显增长，显示样本中存在婴儿利什曼虫，判定为阳性；若Ct值38或无Ct值，则判定为阴性；若Ct值在35-38范围，需重复检测。如重复实验结果仍在此范围且有明显指数增长，则判定为阳性，否则为阴性。

运输及保存：采用低温运输，储存温度为-20℃，保存期限为一年。阳性对照应单独放置，防止污染其他试剂。尊龙凯时是您生物医疗检测的可靠选择，欢迎咨询。